In vitro испытание биотехнологического продукта для пациентов с СПН

05.04.2021

Эксперимент по поиску биотехнологического продукта для пациентов с СПН, нуждающихся в восстановлении объема носовых раковин продолжается!О предварительных этапах исследования можно прочесть здесь: этап 1 и этап 2.

Ранее мы уже предположили, что лучшим вариантом такого продукта станет комбинация из трех компонентов:● метилцеллюлозы;● бесклеточной лиофилизированной матрицы из жировой ткани;● мезенхимальных стволовых клеток.
Следующий важный этап – понять, как именно клетки будут распределяться в готовом биотехнологическом продукте, будут ли они там пролиферировать (расти и делиться) и нормально функционировать. Эти критерии позволят оценить эффективность и прогнозировать ожидаемый терапевтический эффект нового материала. Реализация поставленных задач возможна при эксперименте in vitro. In vitro — особая техника выполнения эксперимента в лабораторных контролируемых условиях вне живого организма.

Эксперимент in vitro

Трехкомпонентный графт заселили МСК и поместили в благоприятные для роста клеток условия. Далее состояние и поведение клеток проверялось путем оценки заселенного материала под фазово-контрастным и флуоресцентным микроскопами. При анализе материала на последнем использовались флуорисцентные красители.

Оценка жизнедеятельности клеток на графте

На изображениях микроскопа визуализируются клетки через 24 часа после их заселения на графт. Слева направо: фазово-контрастный микроскоп, изображение на флуорисцентном микроскопе с FDA – зеленым красителем-маркером живых клеток и PI – красным красителем-маркером мертвых клеток. В коллаже сверху и снизу представлено изображение двух разных полей зрения.
Видно, что МСК равномерно распределились по материалу и адгезировались (прикреплялись) в местах локализации жировой матрицы. Фракция мертвых клеток при этом стабильна. Можно заключить, что бесклеточная жировая матрица служит каркасом для жизнедеятельности и роста клеток, их миграции и нормального функционирования. Метилцеллюлоза, в свою очередь, помогает поддерживать объем и создает 3D-условия для воспроизведения аналогов соединительной ткани.

Выводы этапа

Биотехнологический продукт на основе метилцеллюлозы и бесклеточной лиофилизированной жировой матрицы — перспективный объект для будущего применения для замещения дефектов объема и воспроизведения соединительной ткани de novo. Этот продукт может быть введен малоинвазивно через иглу 18G. Такая процедура будет быстрее и безопаснее операционного вмешательства.Испытание in vitro прошло успешно, следующий этап – исследование на животных in vivo. In vivo – тип эксперимента, происходящего в условиях живого организма.

Этап

Эксперимент на животных необходим для проверки безопасности и эффективности биотехнологического продукта в условиях живой динамической системы – организма. Кроме того, нужно убедиться, что в тканях реципиента трансплантированный материал будет сохранять стабильность и не будет терять значительную долю своего объема.Эксперимент проходил в несколько этапов:
1. Крысам провели инъекции трехкомпонентного продукта подкожно вдоль позвоночника. Объем инъекций составлял 1-2 мл.2. Состояние крыс регулярно проверяли и проводили анализ крови для отслеживания развития иммунных реакций.3. Каждые 7 дней после введения материала объем подкожного импланта измерялся для определения процента потерь. Также производили отбор образцов для гистологических исследований.
Мы уже получили промежуточные результаты, и они оказались очень обнадеживающими.Сейчас эксперимент находится в финальной фазе, и скоро мы сможем поделиться окончательными результатами и планами на будущее!

Подпишитесь на новости, чтобы следить за новыми
этапами разработки!